Полевой материал


MolBiol.ru > Методы > Геномная ДНК > Полевой материал

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · ·

Zbio-wiki

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ИСТОРИЯ ЗООМУЗЕЯ

Сбор полевого материала для ПЦР

Комментарии

Общие
По пунктам

Дополнить

Владимир А. Чистяков
/Ростов-на-Дону/ rw@azovfish.ru

Тема обсуждалась на Форуме.

порезать образец;
поместить в пластиковую пробирку;
залить пробирку до верха 96% этанолом;

через сутки-трое:

первую порцию этанола слить и перезалить новым 96% этанолом;
внести в пробирку сухую EDTA на кончике скальпеля.

MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 17436

Комментарии

Общие

Качество фиксации. Более трех лет занимаюсь сбором коллекции ДНК-содержащих образцов осетровых рыб для Государственной генетической коллекции гокомрыболовства РФ, собрано более 1000 образцов для ПЦР и RAPiD, на качество еще никто не жаловался. ДНК нормально выделяется как фенол/хлороформным методом, так и солевой экстракцией.
Посуда. Лучшая посуда - пластиковые пробирки с герметически завинчивающимися крышками, с "юбкой", которые могут стоять на плоскости, объемом 5 - 10ml, мы покупаем их в фирме Хеликон (Москва).
Маркировка. Помимо надписей на пробирке, которые лучше делать простым мягким карандашом, номер и описание пробы нужно написать на маленькой бумажке и положить в пробирку. В полевых условиях это иногда выручает.
Меры для предохранения от загрязнения одних проб следами других. В море обычно проблем с водой не бывает и инструменты можно мыть, а затем протирать спиртом, но где-нибудь в пустыне наверное стоит иметь запас одноразовых пинцетов и скальпелей.
Этанол. Самые большие проблемы при таком методе фиксации - выпивание части этанола с последующим разбавлением и связанная с ней проблема недолива. Если вы обладаете достаточным авторитетом среди участников экспедиции и примкнувших к ним лиц (егерей, пограничников, проводников, моряков и др.) - фиксируйте чистым 96%этанолом, если нет - раствором фурацилина в этаноле (концентрация не имеет значения, главное устрашающая окраска).

По пунктам

п. 1.

Важен не абсолютный размер(масса), а отношение объема образца к поверхности. Чем быстрее этанол пропитает образец, тем качественнее пройдет фиксация. Наш опыт показывает, что оптимальная толщина образца около 1mm.

п. 2.

Соотношение поверхность/объем фиксируемого образца должно быть максимальным. Отношение образец/этанол должно быть не более 1/5

п. 3.

Пузырьков воздуха оставаться не должно.

п. 4,5.

Это делается для удаления воды и уменьшения концентрации липидов, субстрата для перекисного окисления.

Дополнения, комментарии, вопросы

Люди знающие! Здесь недостаёт того, что знаете вы, но не знал или забыл автор. Этой страницей пользуются ваши коллеги. Пожалуйста, поделитесь с ними опытом. Пригодится всё, что поможет в работе.

Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/

-- как прислать био-картинку --

Дата последней модификации: 30/07/13

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ИСТОРИЯ ЗООМУЗЕЯ

· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·

--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---

--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru · redactor@molbiol.ru · реклама