Средний выход ~50µg на 2ml слюней (если ещё и щеку тереть). Приблизительно столько же получается при стандартной фенол-хлороформенной очистке.
ТКак ни странно, одного silica-фильтрика диаметром 6mm вполне хватает для очистки. Странно потому, что для ПЦР-продуктов ёмкость такого фильтрика должна быть ~ 6µg ДНК. Изготовление спин-колонки описано в протоколе Очистка pDNA на silica spin колонках.
По пунктам
п. 1.
Если хочется собрать побольше клеток стоит поскоблить внутреннюю поверхность щек пластиковым или металлическим шпателем (тереть приблизительно две минуты).
п. 6.
Либо использовать фабричный пластиковый пестик, либо сделать пестик самому из легкоплавкого пластика (мы пробовали из одноразовых шпателей для растирания бактерий): пластик разогревается до размягчения и с силой вдавливается в пробирку.
п. 9.
Можно обойтись и без хлороформа, но с ним супер существенно чище и не требуется проводить дополнительное ЦФ в п.13.
п. 15.
Наверное, можно грузить под вакуумом, но мы не пробовали.
п. 16.
WB может быть без одновалентной соли или содержать NaCl или KCl — результаты одинаковые.
п. 18.
При элюции в 10, 20, 40, 80µl сходит одинаковое количество ДНК (вполне возможно, что можно использовать менее 10µl).
MolBiol.ru >
Методы >
Геномная ДНК > Выделение ДНК из слюны
Zbio-wiki
Дополнить