 | |
 MolBiol.ru >
Методы >
Белки > Осаждение белков ТХУ
| |
|
| |
|
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·  Zbio-wiki
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|
|
|
|||
|
Осаждение белков трихлоруксусной кислотой
Способ 1 (минимальная концентрация белка 5µg/ml) Способ 2 (минимальная концентрация белка <1µg/ml и немного быстрее в исполнении) Продолжение общее для обоих способов Дополнения, комментарии, вопросы к /06.06.2005 18:54/
По моему опыту получается, что количество соосадителя завышено раз в 10, что приводит к существенным потерям на стадии промывания. _Sanya_ /11.01.2006 02:33/
К пункту 8. Осадок белка можно промывать однократно ледяным ацетоном (80% - 100%) Serg-66 /30.11.2006 02:40/
Что-бы, при отмывке белка ацетоном не осаждались соли (что не очень хорошо при электрофорезе) можно предварительно промыть осадок 1 мл 10% ТХУ Layelleth /25.01.2007 18:06/
Сработает ли осаждение ТХУ, если мне нужно отделить белок от липидов перед электрофорезом? - Липиды по моему опыту очень мешают обычному денатурирующему форезу в ПААГ - если их много. А в моем случае липидов много Tom1 /25.01.2007 18:40/
Практически нет..... guest: ммм /26.01.2007 13:09/
От липидов наверное лучше избавлятся осаждением белка ацетоном. lirrok /01.02.2007 14:14/
Подскажите, пожалуйста, как высаживаются белки ацетоном или дайте ссылку. Спасибо. guest: ммм /01.02.2007 14:34/
---Подскажите, пожалуйста, как высаживаются белки ацетоном или дайте ссылку. Спасибо. Ну как,как? Если количественно весь белок высаживать, то охладить раствор с белком до 00С, а ацетон градусов до -20 и медленно, в течении минутки, долить 4-5V ледяного ацетона в раствор белка, перемешивая, и на -200 - минимум на час, максимум - навсегда. Время выдержки на -20 зависит от концентрации белка: если белка очень много то может хватить и 10', если мало, то суток обычно достаточно. Внимание! В ацетоне практически нерастворимы неорганические соли, поэтому, если они присутствуют в высоких концентрация в исходном растворе белка, то выпадают в осадок вместе с белком и загрязняют его. lirrok /01.02.2007 14:45/
Простите, если задаю глупые вопросы, т.к. в работе с белками - новичок. А что дольше делать? Мыть? В чём растворять после? Нужно ли сушить и т.д.? lirrok /01.02.2007 14:46/
Опс Не "дольше", а "дальше" :-) Oleg Klychnikov /01.02.2007 15:43/
(guest: ммм @ 01.02.2007 11:34)  Внимание! В ацетоне практически нерастворимы неорганические соли, поэтому, если они присутствуют в высоких концентрация в исходном растворе белка, то выпадают в осадок вместе с белком и загрязняют его. 4 объема ацетона к одному объему белка (80%) на ночь на -20 и будет вам счастье после этого фуговать эдак 10-20(30) мин, эдак 10-20 kg при 4С отобрать супер, сушить - можно на спидваке, можно просто открыть эппендорфу, если нужна активность после такого издевательства, то сушить лучше на -20 с открытыми пробирками и фсе надо только иметь ввиду, что как любой метод преципитации, ацетонирование имеет свои ограничения на количество белка (если его мкг - то надо ко-преципитировать), на всякие разные детергенты, если есть в буфере (белок просто может не сесть), ну и всяки другие прелести, так, что лучше всего пробовать на не очень дорогом для сердца образце пилотное высаживание только в этом топике - это офф-топ   Гость /26.03.2008 18:57/
плиз, никогда не высаживайте сукрозный градиент ацетоном! Guest /27.03.2008 22:29/
Даже после солюбилизации SDS белок хорошо высаживается, если сначала проинкубировать 1 час на холоду с 10% ТХУ (в конечной концентрации), а затем разбавить равным объемом ацетона и оставит на ночь при -20 град, как здесь и советовали. Гость /08.04.2008 18:04/
а мы промываем от ТХУ обычным охлажденным -20С этанолом plotter /29.01.2009 17:36/
А как отмыть осажденный тху осадок от тритона? guest: ммм /29.01.2009 18:11/
-А как отмыть осажденный тху осадок от тритона? А почему вы думаете, что он там остается. Тритон вроде в ТХУ растворим. Ну промойте метанолом, а затем метанолом с изобутанолом, вот как-то так. Vadim Sharov /29.01.2009 22:29/
МММ, прав: отмойте раза два осадок тем же ТХУ, а само ТХУ холодным ацетоном. david /29.01.2009 22:39/
... Но лучше этих осаждений избегать. уж хлопотное это дело растворять осаздхенный белок. Я как то взял клетки с тарелки 10 см и выделял белок разным объемом лизис буфера. вестерн вышел одинаковый. С тех пор, я всегда сначала клетки соскребываю ПБС-ом, делаю спин даун, и полученный осадок растворяю в 50-100 микроллитров лизис буфера plotter /30.01.2009 11:59/
ммм, думаю так, потомучто осадок в сравнении с контролем, насыщеннее раза в 3. И pH другой сильно. И оно мылкое малость. Но тут такая система, что и не такое бывает... guest: ммм /30.01.2009 14:07/
--ммм, думаю так, потомучто осадок в сравнении с контролем, насыщеннее раза в 3. Гхм! А может это дезоксихолат или любые другие органические кислоты(или их соли). --И pH другой сильно. ЧТО!!! рН НЕ КИСЛЫЙ?!! Значит вы мало льете кислоты(ТХУК) или у вас исходно сильно щелочная среда возможно имеет смысл подкислить ее перед осаждением уксусом или фосфорной кислотой. Тритон на рН не влияет и сам вроде в кислой среде растворим. plotter /30.01.2009 16:04/
Нет там солей (почти). Так, остатки незначительные, фрагменты микромолей. Дезоксихолат не заказал ещё  Бум курить... Гость /27.03.2009 10:47/
Подскажите, пожалуйста!!! Я хочу выделить белок из эндотелиальных микрочастиц плазмы крови. Пробовала разрушать мембрану микрочастиц ультразвуком, а потом осадить ацетоном.После оставила на -20 на ночь, отцентрифугировала, высушила осадок, который потом растворила в буфере - но концентрация белка оказалась очень мала - что делать? Гость /07.04.2009 22:35/
Подскажие, пожайлуста, что подойдет для мгновенной коагуляции белка для качественного анализа? Почему именно ТХУ так распространена для осаждения? Каков механизм ваимоействия ТХУ с беком? Vadim Sharov /08.04.2009 03:11/
(Гость @ 07.04.2009 21:35) Подскажие, пожайлуста, что подойдет для мгновенной коагуляции белка для качественного анализа? Почему именно ТХУ так распространена для осаждения? Каков механизм ваимоействия ТХУ с беком?Есть такой автор Остерман. Почитайте.  guest: plotter /24.02.2011 18:07/
Нашел в тяговом шкафу около 2-х литров ТФУ (трифтор...) Как она работает в плане осаждения? Не пробовал кто? guest: ммм /24.02.2011 18:50/
--Нашел в тяговом шкафу около 2-х литров ТФУ (трифтор...) Я думаю вам их с радостью обменяют на 100кг ТХУК Seleniti /27.02.2012 22:10/
Подскажите пожалуйста,для чего после осаждения белка 5 % ТХУ, затем охлажденным 95 % ацетоном нужно осадок растворять в 0,5 N NaOH при нагревании?Для того,чтобы избавиться от ТХУ?Или для чего другого? guest: ммм /28.02.2012 06:27/
---Подскажите пожалуйста,для чего после осаждения белка 5 % ТХУ, затем охлажденным 95 % ацетоном нужно осадок растворять в 0,5 N NaOH при нагревании?Для того,чтобы избавиться от ТХУ?Или для чего другого? 1) В обсуждаемом протоколе, указанные вами процедуры отсутствуют. 2) От ТХУК вы не избавитесь, просто она перейдет в соль тихлорацетат натрия. guest: валерий /07.11.2012 13:02/
осадил белок тху, после чего не нашел N-конца. Не может ли тху алкилировать аминогруппы белка? guest: ммм /07.11.2012 15:15/
--осадил белок тху, после чего не нашел N-конца. Не может ли тху алкилировать аминогруппы белка? Алкилировать не может, может ацилировать. Но вероятность низкая, возможно ваш белок модифицировался еще на стадии(ях) где-то до осаждения. watchesbiz /08.12.2021 16:31/
watchesonline89 /28.12.2022 14:14/
watchesonline89 /02.01.2023 11:04/
|
Смотри также: /ссылки на сетевые ресурсы/
|
|
|
|
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ · Zbio-wiki
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|
Дополнить