Однокомпонентные растворы


MolBiol.ru > Растворы > Прописи > Однокомпонентные растворы

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · ·

Zbio-wiki

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ИСТОРИЯ ЗООМУЗЕЯ

Однокомпонентные растворы

Органические вещества

pK_a и температурная зависимость pH для обычно используемых буферов
ATP 0.1M
Betaine 5M
Cresol red (Na) 50mM
DTT 1M, 2.2M
dNTP’s 100mM
EDTA 0.5M
EtBr 10mg/ml
Gelatin 2%
Glucose 1; 1.5; 2M
Guanidine HCl 1-8M
HEPES 1M
Imidazol 2M
Paraformaldehyde 37%
PEG 40%
PMSF 100mM
Retinoic acid 10mM
Sucrose 1; 2; 2.5M
Tris Cl 1M
Зависимость pH от температуры для Tris Cl
Tricine 1M
Triethanolamine 1M
Urea 1-10M

Щелочи и кислоты

Общая таблица
NaOH 10M, 1M
KOH 5M
ТХУ 100%

Детергенты

N-Lauroylsarcosine Na 10%
SDS 10%

Органические растворители

Фенол
ЭтанолEtOH
Приготовление 100% EtOH

Дополнить

Плотности некоторых растворов можно посмотреть в документе "Плотности растворов кислот, оснований и органических веществ".

Органические вещества

pK_a и температурная зависимость pH для обычно используемых буферов

Буфер	Mw	pK_a 20^oC	Рабочий диапазон	delta pK_a на 10^oC
MES 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid	195.2	6.15	5.5-6.7	-0.110
Bis-Tris bis(2-hydroxyethyl)iminotris(hydroxymethyl)methane	209.2	6.5	5.8-7.2
ADA N-(2-acetamido)-2-imidoacetic acid	190.2	6.60	6.0-7.2	-0.110
PIPES piperasine-N,N'-bis(2-ethanesulfonic acid)	302.4	6.80	6.1-7.5	-0.085
ACES 2-[(2-amino-2-oxoethyl)amino]ethanesulfonic acid	182.2	6.90	6.1-7.5	-0.200
MOPSO 3-(N-morpholino)-2-hydroxypropanesulfonic acid	225.3	6.9	6.2-7.6
Imidazol - HCl "Справочник Биохимика" Досон Р. и др. М:Мир,1991 /прислал Волков И.Ю., ИМГРАН/	68.08	6.95	6.2-7.8
Bis-Tris Propane 1,3-bis[tris(hydroxymethyl)methylamino]propane	282.3	6.8*	6.3-9.5
BES N,N-bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethanesulfonic acid	213.2	7.15	6.4-7.8	-0.160
MOPS 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid	209.3	7.20	6.5-7.9	-0.013
TES N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid	229.2	7.50	6.8-8.2	-0.200
HEPES N-(2-hydroxyethyl)piperazine-N'-(2-ethanesulfonic acid)	238.3	7.55	6.8-8.2	-0.140
DIPSO 3-[N,N-bis(2-hydroxyethyl)amino]-2-hydroxyprpanesulfonic acid	243.3	7.6	7.0-8.2
TAPSO 3-[N-tris(hydroxymethyl)methylamino]-2-hydroxypropanesulfonic acid	259.3	7.6	7.0-8.2
HEPPSO N-(2-hydroxyethyl)piperazine-N'-(2-hydroxypropanesulfonic acid)	268.3	7.8	7.1-8.5
POPSO piperazine-N,N'-bis(2-hydroxypropanesulfonic acid)	362.4	7.8	7.2-8.5
TEA triethanolamine	149.2	7.8	7.3-8.3
EPPS N-(2-hydroxyethyl)piperazine-N'-(3-propanesulfonic acid)	252.3	8.0	7.3-8.7
Tricine N-tris(hydroxymethyl)methylglycine	179.2	8.15	7.4-8.8	-0.210
Tris (TRIZMA) tris(hydroxymethyl)aminomethane	121.1	8.30	7.0-9.1	-0.310
Bicine N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine	163.2	8.35	7.6-9.0	-0.180
TAPS N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfonic acid	243.3	8.4	7.7-9.1
Glycylglycine		8.40		-0.280
AMPSO 3-[(1,1-dimethyl-2-hydroxyethyl)amino]-2-hydroxypropanesulfonic acid	227.3	9.0	8.3-9.7
CHES 1-(N-cyclohexylamino)ethanesulfonic acid	207.3	9.3	8.6-10.0
CAPSO 3-(cyclohexylamino)-2-hydroxy-1-propanesulfonic acid	237.3	9.6	8.9-10.3
AMP 2-amino-2-methyl-1-propanol	89.1	9.7	9.0-10.5
CAPS 3-(cyclohexylamino)-1-propanesulfonic acid	221.3	10.4	9.7-11.1

Крезоловый красный / Cresol red (Na)

õðàíèòü ïðè +4, -20^oC

	Êîíö.	Ñòîê	1ml	50ml
Cresol red (Na)	50mM	404.4g/M	20.2mg	1.01g
H₂O		mQ

очень удобный краситель, в концентрации ~0.2mM совместим с рестрикцией, PCR, сиквенсом, а также может быть использован как цветной маркер для электрофореза;

цвет красителя зависит от рН (красный при рН >7.5, жёлтый при рН <7.0). Как цветовой индикатор может быть использован при денатурации двухцепочечной DNA для сиквенса, при выделении DNA из агарозного геля на silica-носителе.

Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/

Buffer design - онлайн расчёт для большого списка буферов (Prof. R.Beynon) на странице Java based Molecular Biologist's Workbench EMBL.
Buffer Calculator на сайте LabVelocity. Требуется регистрация (бесплатная).

-- как прислать био-картинку --

Приготовление dNTP’s

Быстрый протокол приготовления ~100mM стока

объединить все четыре dNTP’s (по 250mg) и растворить в 3.676ml H₂O;
+ 424µl 5M NaOH;
проверить рН, капнув ~0.5µl на рН-бумажку.

Аккуратный (правильный) протокол приготовления 100mM стоков

добавить необходимое количество H₂O и Tris base 1M (смотри таблицу; при этом можно полагать, что объём, занятый солью ~150µl);

		Mw	V_(H2O)	V_{(Tris base 1M)}	V_(final)
dATP	C₁₀H₁₄N₅O₁₂P₃Na₂x3H₂O	589.2	3.24ml	850 µl	4.24ml
dGTP	C₁₀H₁₃N₅O₁₃P₃Na₃x2H₂O	609.2	3.55ml	400 µl	4.10ml
dCTP	C₉H₁₃N₃O₁₃P₃Na₃x2H₂O	569.1	3.44ml	800 µl	4.39ml
dTTP	C₁₀H₁₄N₂O₁₄P₃Na₃x2H₂O	584.1	3.73ml	400 µl	4.28ml

проверить рН, капнув ~0.5µl на рН-бумажку;
спектрофотометрически проверить качество и концентрацию (удобно использовать финальное разведение 1:5000 (~20µM). При этом показания спектрофотометра оказываются в районе A_m~0.3, а концентрация:
с[mM]=k_1:5000xA_m).

Качество:

dATP pH 7.0	A₂₅₀/A₂₆₀=0.80+0.03 A₂₈₀/A₂₆₀=0.12+0.02	dCTP pH 2.0(!)	A₂₅₀/A₂₆₀=0.45+0.03 A₂₈₀/A₂₆₀=2.10+0.15 A₂₉₀/A₂₆₀=1.60+0.10
dGTP pH 7.5	A₂₅₀/A₂₆₀=1.18+0.04 A₂₈₀/A₂₆₀=0.67+0.03 A₂₉₀/A₂₆₀=0.28+0.03	dTTP pH 7.5	A₂₅₀/A₂₆₀=0.65+0.03 A₂₈₀/A₂₆₀=0.73+0.03

Концентрация:

	Mw	A_m	pH	E	k (для 1:5000)
dATP[Na₂]	589.2	259	7.0	15.2x10³	328.9
dGTP[Na₃]	609.2	253	7.5	13.7x10³	365.0
dCTP[Na₃]	569.1	280	2.0 (!!!)	13.0x10³	384.6
dTTP[Na₃]	584.1	267	7.5	9.6x10³	520.8

ATP [Na₄]	595.1	259		15.4x10³
CTP [Na₄]	571.1	280		13.0x10³
GTP [Na₄]	611.1	252		13.7x10³
UTP [Na₄]	572.1	262		10.2x10³

Концентрация: c[М]=A_max/E; A_max = адсорбция на максимуме поглощения.

Paraformaldehyde

ПФА (параформальдегид) 37% (свежеприготовленный для иммуногистохимии).

1. в пробирке с завинчивающейся крышкой смешать:

ПФА (òâ.) = 0.37g,
H₂O = 1.0ml
NaOH (1N) = 14µl;

2. растворить в кипящей водяной бане (кипятить ~1-3'; до тех пор, пока pH не опуститься до ~7.0).

Зависимость pH от температуры для 50mM Tris Cl.

pH при			g/50ml 1M или g/liter для 0.05 M
5^oC	25^oC	37^oC	Tris HCl	Tris Base	H₂O	Tris HCl	Tris Base	H₂O
7.55	7.00	6.70	7.28	0.47	44.28
7.66	7.10	6.80	7.13	0.57	44.33
7.76	7.20	6.91	7.02	0.67	44.34
7.89	7.30	7.02	6.85	0.80	44.38
7.97	7.40	7.12	6.61	0.97	44.45
8.07	7.50	7.22	6.35	1.18	44.50
8.18	7.60	7.30	6.06	1.39	44.58
8.26	7.70	7.40	5.72	1.66	44.65
8.37	7.80	7.52	5.32	1.97	44.74
8.48	7.90	7.62	4.88	2.30	44.85
8.58	8.00	7.71	4.44	2.65	44.94
8.68	8.10	7.80	4.02	2.97	45.04
8.78	8.20	7.91	3.54	3.34	45.15
8.88	8.30	8.01	3.07	3.70	45.26
8.98	8.40	8.10	2.64	4.03	45.36
9.09	8.50	8.22	2.21	4.36	45.46
9.18	8.60	8.31	1.83	4.65	45.55
9.28	8.70	8.42	1.50	4.90	45.63
9.36	8.80	8.51	1.23	5.13	45.67
9.47	8.90	8.62	0.96	5.32	45.75
9.56	9.00	8.70	0.76	5.47	45.80
9.67	9.10	8.79	0.69	5.53	45.81

TrisCl: 250ml 1M

V HCl	V HCl	pH
	0	10.44
	1	9.54
	2	9.26
	3	9.08
	3.7	8.98
5ml		8.76
6ml		8.67
	10	8.4
11ml		8.22
	14	8.13
13.5ml		8.06
14ml		8.04
15ml		7.97
	17	7.92
16.5ml		7.82
16.7ml		7.8
17ml		7.77
18.3ml		7.63
18.6ml		7.59
	20	7.75
	23	7.4

Щелочи и кислоты

название:	формула:	Mw	% (w/w)	[M]	g в-ва в 1L	p [g/ml]	ml/L для 1M р-ра
Едкий натр	NaOH	40	50%	19.1	763	1.53	52.4
			30.1%	10.0	400	1.329	100
			10%	2.75	111	1.11	363.6
Едкое кали	KOH	56.1	50%	13.5	757	1.52	74.1
			23.06%	5.0	280.6	1.217	200
			10%	1.94	109	1.09	515.5
Гидроксиламин	NH₄OH	35.0	28%	14.8	251	0.898	67.6
Уксусная кислота, ледяная	CH₃COOH	60.05	99.5%	17.4	1045	1.05	57.5
Уксусная кислота	CH₃COOH	60.05	36%	6.27	376	1.045	159.5
Муравьиная кислота	HCOOH	46.02	90%	23.4	1080	1.20	42.7
Хлористоводородная кислота	HCl	36.5	36%	11.6	424	1.18	86.2
Хлористоводородная кислота	HCl	36.5	10%	2.9	105	1.05	344.8
Азотная кислота	HNO₃	63.02	71%	15.99	1008	1.42	62.5
			67%	14.9	938	1.40	67.1
			61%	13.3	837	1.37	75.2
Хлорная кислота	HClO₄	100.5	70%	11.65	1172	1.67	85.8
Хлорная кислота	HClO₄	100.5	60%	9.2	923	1.54	108.7
Фосфорная кислота	H₃PO₄	98.0	85%	18.1	1445	1.71	55.2
Серная кислота	H₂SO₄	98.1	96%	18.0	1766	1.84	55.6

см. опасные вещества.

Детергенты

Детергенты - это растворимые в воде полярные липиды. Обычно они классифицируются по типу гидрофильной группы: анионные, катионные, амфотерные и неионные. Обычно неионные и амфотерные детергенты денатурируют белки в меньшей степени, чем ионные детергенты. Sodium cholate и sodium deoxycholate - самые слабые денатуранты среди обычно используемых детергентов.
Две важные характеристики детергентов: (i) критическая концентрация мицелообразования (CMC) - концентрация при которой мономеры детергента начинают образовывать мицелы и (ii) молекулярный вес мицелл (детергенты с высоким мол. весом мицелл сложно убрать диализом, они проскакивают сквозь гель-фильтрационные колонки). Обе характеристики зависят от используемого буферного раствора. Обычно добавление соли понижает CMC и увеличивает размер мицелл.

Детергент	T_пл.	Mw [Da]		CMC
Детергент	T_пл.	мономер	мицелла	%(w/v)	M
Анионные
SDS	206	288	18,000	0.23	8.0 x 10^-3
Cholate	201	430	4,300	0.60	1.4 x 10^-2
Deoxycholate	175	432	4,200	0.21	5.0 x 10^-3
Катионные
C₁₆TAB	230	365	62,00	0.04	1.0 x 10^-3
Амфотерные
LysoPC	-	495	92,000	0.0004	7.0 x 10^-6
CHAPS	157	615	6,150	0.49	1.4 x 10^-3
Zwittergent 3-14	-	365	30,000	0.011	3.0 x 10^-4
Неионные
Octyl glucoside	105	292	8,000	0.73	2.3 x 10^-2
Digitonin	235	1,229	70,000	-	-
C₁₂E₈	-	542	65,000	0.005	8.7 x 10^-5
Lubrol PX	-	582	64,000	0.006	1.0 x 10^-4
Triton X-100	-	650	90,000	0.021	3.0 x 10^-4
Nonident P-40	-	603	90,000	0.017	3.0 x 10^-4
Tween 80	-	1,310	76,000	0.002	1.2 x 10^-5

Детергент	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	1 - Сильно денатурирующий; 2 - Диализуемый; 3 - Ион-обмениваемые, не подходят для ионообменной хромотографии; 4 - Сложные ионы; 5 - Сильное погл. A₂₈₀; 6 - Мешает анализам; 7 - Преципитирует на холоду; 8 - Высокая цена; 9 - Лёгкость очистки; 10 - Изотоп-меченье; 11 - Определённый состав; 12 - Автоокисление
Анионные
SDS	+	+	+	+	-	-	+	-	+	+	+	-
Cholate	-	+	+	+	-	-	-	-	+	+	+	-
Deoxycholate	-	+	+	+	-	-	+	-	+	+	+	-
Катионные
C₁₆TAB	+	+	+	-	-	-	+	-	+	-	+	-
Амфотерные
LysoPC	+/-	-	-	-	-	-	-	+	+/-	+	+	-
CHAPS	-	+	-	-	-	-	-	+	+	-	+	-
Zwittergent 3-14	+/-	+/-	-	-	-	-	-	+	+	-	+	-
Неионные
Octyl glucoside	-	+	-	-	-	-	-	+	-	+	+	-
Digitonin	-	-	-	-	-	-	-	+	+	-
C₁₂E₈	-	-	-	+/-	-	-	-	+	-	+	-	+
Lubrol PX	-	-	-	+/-	-	+/-	-	-	-	+	-	+
Triton X-100	-	-	-	+/-	+	+/-	-	-	-	+	-	+
Nonident P-40	-	-	-	+/-	+	+/-	-	-	-	+	-	+
Tween 80	-	-	-	+/-	-	+/-	-	-	-	+	-	+

C₁₆TAB - hexadecyl trimethylammonium bromide;
LysoPC - lysophosphatidylcholine.
* Sodium cholate и sodium deoxycholate нерастворимы при <pH 7.5 или при ионной силе выше 0.1%. SDS часто выпадает в осадок при температуре ниже 20^oC;
** Ионные детергенты вызывают проблемы при изоэлектрическом фокусировании;
*** Ионные и амфотерные детергенты обычно удаётся убрать диализом;
**** Фенол-содержащие детергенты (например Triton X-100 и NP-40) вызывают преципитацию при Folin protein assay (но они не мешают Bradford protein assay).

Органические растворители

Фенол

Фенол /оксибензол; карболовая кислота/, C₆H₅OH; Mw=94.1g/M
p=1.054, t_m= 43, t_b= 182, pKa=10.0
растворимость: 6.8 ¹⁶H₂O, бесконечно ⁶⁶H₂O; бесконечно EtOH

опасное вещество.

Приготовление "кислого" и "нейтрального" фенола

а) начиная с перегонки:

перегнать под H₂O;
оставить водной фазы столько, чтобы она составляла ~1/10 от объёма фенольной фазы;
добавить 8-гидроксихинолин до 0.1% (относительно фенольной фазы) и ßMeEtOH (2-меркаптоэтанол) до 0.2% (относительно водной фазы = 0.02% относительно фенольной);

то, что получилось на этом этапе – "кислый фенол*", õðàíèòü ïðè -20^oC (~год);

к свежему (или перегнанному) фенолу + равный объём 0.2 M Tris-base, смешивать ~0.5-1h;
снять водную фазу;
+ 0.1V 0.1M Tris-Cl, pH 8.0
0.2% ßMeEtOH
смешивать ~0.5-1h;
õðàíèòü ïðè 4^oC (в темноте) ~месяц.

b) начиная с хорошего покупного:

насытить фенол H₂O (добавив приблизительно 1/5 объёма воды;
далее - аналогично (а), начиная с п.2.

______________
* Для экстракции RNA "кислый фенол" лучше уравновесить "буфером для уравновешивания кислого фенола" (õðàíèòü ïðè 4^oC):

	Êîíö.	Ñòîê	100ml
AcONa, pH 5.1	50mM	3M	1.67ml
EDTA	10mM	0.5M	2.0ml
H₂O		mQ	96.0ml

проверить pH, если надо, довести до pH 5.1 разбавленной уксусной кислотой (1:100).

в методиках "Mitchell Group" написано, что кислый фенол относительно стабилен, а нейтрализованный - нет. Они рекомендуют готовить нейтральный фенол лишь на несколько недель работы.
8-гидроксихинолин и ßMeEtOH - антиоксиданты, продлевают жизнь фенолу. Кроме того, 8-гидроксихинолин красит фенол в приятный жёлтый цвет, помогающий разобраться, где какая фаза, и, говорят, является слабым ингибитором RNase.

EtOH

Этанол, спирт, CH₃CH₂OH; Mw=46.1g/M

плотности водных растворов этанола.

сильно гигроскопичен, (õðàíèòü ïðè NT в плотно закрытой посуде);

t_пл.=-117.3^oC; t_кип.=78.5^oC.

	Êîíö.	Ñòîê	300ml
EtOH	70%	96%	190g
H₂O		mQ	70ml

Приготовление 100% EtOH.

высушить в термостате (65^oC, 1-2 суток) медный купорос до почти белого цвета;
засыпать его на 1/4 в емкость, в которой будет находиться 100% EtOH;
добавить 96% спирт, интенсивно встряхивать и оставить на 1-2 суток. CuSO₄"заберёт" воду из спирта.

Тест на абсолютный спирт: добавить каплю к некоторому количеству ксилола, если появится муть - спирт не абсолютный.

MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 103892

Дополнения, комментарии, вопросы

Люди знающие! Здесь недостаёт того, что знаете вы, но не знал или забыл автор. Этой страницей пользуются ваши коллеги. Пожалуйста, поделитесь с ними опытом. Пригодится всё, что поможет в работе.

Redactor /08.10.2005 00:10/

BSA;
раствор 2mg/ml - A280 = 1.334
http://www.piercenet.com/files/TR0006dh4-E...oefficients.pdf ( http://www.piercenet.com/files/TR0006dh4-Extinction-coefficients.pdf )

Гость /31.01.2007 03:19/

BSA;
раствор 2mg/ml -кто знает, как лучше серию сделать для калибровки белка по Брэдфорду-для начин. урок.

Гость /19.06.2007 10:44/

как приготовить 10% спиртовой раствор йода?

Yarl /27.07.2007 18:06/

4 M guanidine thiocyanate, 0.2 M sodium acetate pH 5.0, 25 mM EDTA, 2.5% (w/v) PVP-40 potassiym acetate 1M помогите пожалуйста приготовить

Гость /22.08.2007 23:49/

EDTA, Mw- 292g, Так?
EDTA-Na2- 372g...
Так что же используется в таблице, EDTA-Na2 или что-то еще?

Гость /19.10.2007 14:07/

А как приготовить версен, пожалуйста..

Гость /26.05.2008 15:19/

Гриша-лучший!!!!!!!!!!!!!!

Гость /10.04.2009 09:17/

Вопрос от чайника. Какое количество праймера (концентрация 88 pmol/mkl, молярная масса 5530) нужно взять чтобы финальная концентрация в объеме 0,2 мкл была от 0,1 до 0,5 мкМ. Зарание благодарен

watchesbiz /01.01.2022 17:16/

https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1 ( https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1 )
https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshut...lica-Watches-UK ( https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshutuk/Hints-to-Help-You-Pick-the-Best-Replica-Watches-UK )
https://www.tuugo.us/Companies/best-replica...s/0310006695505 ( https://www.tuugo.us/Companies/best-replica-watches/0310006695505 )
https://topsitenet.com/article/988178-hints...ca-rolex-watch/ ( https://topsitenet.com/article/988178-hints-on-choice-of-a-high-quality-employed-ladies-replica-rolex-watch/ )
http://simp.ly/p/nxGlWb ( http://simp.ly/p/nxGlWb )
https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-Hig...lex-Watch-02-22 ( https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-High-Quality-Employed-Ladies-Replica-Rolex-Watch-02-22 )
https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html ( https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html )
https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a ( https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a )
https://zenwriting.net/replicawatches24/hin...ica-rolex-watch ( https://zenwriting.net/replicawatches24/hints-on-choice-of-a-high-quality-employed-ladies-replica-rolex-watch )
https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en ( https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en )
http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/ ( http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/ )
https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_...ica_rolex_watch ( https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_choice_of_a_high_quality_employed_ladies_replica_rolex_watch )
https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom ( https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom )
https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/ ( https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/ )
https://en.gravatar.com/allreplicawatches24 ( https://en.gravatar.com/allreplicawatches24 )
https://8tracks.com/replicawatchesuk ( https://8tracks.com/replicawatchesuk )

--- страница форума с комментариями --

Дата последней модификации: 30/07/13

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ИСТОРИЯ ЗООМУЗЕЯ

· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·

--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---

--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru · redactor@molbiol.ru · реклама