Работа с ферментами должна соответствовать двум утверждениям: (i) обычно ферменты очень плохо переносят даже кратковременный нагрев до комнатной температуры, (ii) обычно они очень дороги.
Старайтесь работать с разумными аликвотами ферментов, а не с исходными пробирками. Стоковые пробирки храните в надёжном морозильнике. Достоинство аликвот - если с ферментом что то случится (загрязнение, инактивация), то будет потеряна лишь часть. Недостаток - перенос из одной пробирки в другую означает, что часть фермента останется на стенках типа и пробирки.
Фермент - обычно самый уязвимый компонент реакции, требующий для себя определённого pH и соли. Поэтому вносите его последним, когда все остальные компоненты уже добавлены и СМЕШАНЫ (!!!).
Используйте ровно необходимые (или только чуть большие) количества ферментов. Слишком большие количества ферментов опасно брать в реакцию, так как:
- все ферменты содержат примеси,
- иногда избыток фермента не только бесполезен, но и вреден,
- как уже говорилось, почти все ферменты дороги.
Очень плохой тон - измерять количество ферментов не в единицах активности, а в микролитрах.
Ферменты извлекаются из морозильника (в переносном морозильничке) непосредственно перед внесением и как можно быстрее убираются обратно. Если фермент находится в 0.5ml эппендорфе (а лучше использовать для ферментов именно эти пробирки), то нужно использовать 1.5ml охлаждённый эппендорф как адаптер.
Пробирку с ферментом держат пальцами с боков на том уровне, на котором раствора фермента нет.
Очень важно !!! Перед тем как открыть пробирку нужно сбросить её содержимое на дно кратковременным (~2-5'') центрифугированием. Этого можно не делать лишь в том случае, если вы постоянно пользуетесь этой пробиркой и уверены в том, что её никто не переворачивал "с прошлого раза".
Дополнения от людей знающих:
Не считайте a priori, что все ферменты надо хранить в морозильнике, постарайтесь получить точные сведения об условиях хранения именно того фермента, с которым работаете. Некоторые ферменты при однократном замораживании/оттаивании необратимо инактивируются. Такие ферменты, как правило, лиофилизовать тоже нельзя.
MolBiol.ru >
Орг. вопросы >
Для студентов > Ферменты
ZBIO
Дополнить